Visible and rapid detection of feline chaphamaparvovirus using multienzyme isothermal rapid amplification and lateral flow dipstick assay

發表單位：河南省動物疫病診斷與綜合控制工程技術中心

發表期刊：Frontiers in Cellular and Infection Microbiology

影響因子：4.6

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貓查帕哈馬病毒(FeChPV)是一種新型細小病毒，2019年首次在加拿大腹瀉貓群中被發現。該病毒致病性和分子特徵仍不明確，並存在宿主與遺傳多樣性，需要進一步的流行性病學調查。现在尚無 FeChPV 檢測的標準化方法。

多酶恆溫快速核酸擴增-側向流試紙條法（MIRA-LFD）已成功用於多種病毒的檢測，具有快速簡便、無需精密儀器等優勢。研究團隊建立適用於 FeChPV 的 MIRA-LFD 檢測方法，解決基層臨床檢測難題。在不依賴精密儀器的情況下，利用MIRA-LFD方法在37℃下在20min內完成了對FeChPV的檢測，並與其他病毒沒有任何交叉反應。檢測限為32.3copies/μL，高於PCR方法10倍。此外，MIRA-LFD方法在417隻腹瀉貓中檢測到29份FeChPV陽性樣本，陽性率略高於巢式PCR方法。這些結果表明，建立的檢測FeChPV的MIRA-LFD方法是一種高效、經濟、可靠、簡便的方法，有助於FeChPV感染的早期預防和控制。

臨床樣本：本研究使用的直腸拭子樣本採集自2022至2024年間廣東省、河南省、安徽省、浙江省及內蒙古自治區寵物醫院的632隻貓（其中417隻患有腹瀉，115隻健康貓）和474隻犬（其中342隻患有腹瀉，132隻健康犬）。

核酸擴增：將提取好的DNA核酸加入至MIRA體系中，重組酶和引物形成複合體；在輔助蛋白和單鏈結合蛋白的幫助下，侵入雙鏈 DNA 模板，引物與同源互補區域結合形成 D-loop 區域，同時重組酶從複合體解體；聚合酶結合到引物的 3』末端並啟動 DNA 合成，對模板上的目標區域進行指數式擴增。這個過程迅速高效地循環，從而完成目的片段超快速擴增，僅需15min。

試紙條顯色：將核酸擴增產物1:10稀釋後滴加至試紙條上，5min後讀取結果。

整個核酸擴增至試紙條顯色僅需20min。

實驗中使用了bbin宝盈(中国)生物產品：

根據瓊脂糖凝膠電泳的結果，擴增5、10、15和20min均可以擴增出目的條帶，擴增15min目的條帶強度達到峰值，該項目的最佳反應時間為15min。36℃、37℃、38℃、39℃和40℃擴增均能擴增出目的條帶，其中39℃擴增的目的條帶最明亮，該項目的最佳反應溫度為39℃。

2.檢測性能

靈敏度：

（圖A：MIRA使用瓊脂糖凝膠電泳進行結果呈現）

（圖B：巢式PCR使用瓊脂糖凝膠電泳進行結果呈現）

（圖C：MIRA使用核酸試紙條進行結果呈現）

將樣本從3.23×10⁶ copies/μL開始進行10倍梯度稀釋。其中，巢式PCR使用瓊脂糖凝膠電泳可穩定檢出3.23×10²copies/μL；MIRA使用瓊脂糖凝膠電泳、使用核酸試紙條都可穩定檢出3.23×10¹copies/μL。

MIRA方法學使用兩種不同結果呈現方式靈敏度一致，MIRA方法靈敏度優於巢式PCR。

特異性：

（1:FeChPV, 貓查帕哈馬病毒；2:FPV, 貓泛白細胞減少症病毒；3:FeAstV,貓星狀病毒；4:FBoV,貓博卡病毒；5:CachaV,犬查帕病毒；6: negative control）

新建立的MIRA-LFD方法只檢測到FeChPV，與其他參考病毒沒有交叉反應，表明其具有良好的特異性。

該研究建立了檢測FeChPV的MIRA-LFD方法，而不需要高精度的儀器。MIRA-LFD檢測方法作為一種高效、經濟、可靠的檢測方法，具有較高的敏感性和特異性，更適合於臨床檢測，為FeCHPV的早期預防和控制给予技術支持。

除了上圖系列現場快檢產品，bbin宝盈(中国)生物還给予：

科研原料：给予用於基礎科研研究的試劑原料與技術支持，以及項目文獻參考。

OEM生產：擁有全流程自主生產高純度高活性成品的能力，實現工業化量產。

項目委託開發：序列信息與序列比對分析結果、項目引物探針設計與合成、項目質粒合成與樣本、項目報告和結果等。

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