畜牧業是全球農業生產的重要組成部分，其中豬、牛、羊的養殖尤為關鍵。隨着養殖規模的擴大,動物疫病的傳播和防控已成為影響產業效益的核心問題。傳統的病原體檢測方法雖然有效，但普遍面臨檢測速度慢、成本高、設備要求複雜等挑戰，無法在養殖場或偏遠地區及時響應。 隨着生物技術的發展，MIRA技術（多酶恆溫快速核酸擴增技術）成為疫病防控的有力工具，為養殖場提供了高效、準確的解決方案。

豬作為全球重要的畜牧動物之一，面臨多種病毒、細菌的威脅，尤其是非洲豬瘟(ASF)近年來對全球養豬業造成了巨大影響。以下是幾種重要的豬病原體：

-豬瘟病毒(CSFV)：高度傳染的病毒性疾病,影響全球養豬業。豬瘟疫苗的廣泛使用有所緩解,但持續監控是關鍵。

-非洲豬瘟病毒(ASFV)：近年來，ASFV的爆發給全球養豬業帶來了毀滅性的打擊。由於目前尚無有效疫苗，早期快速診斷顯得尤為重要。 

-豬繁殖與呼吸綜合徵病毒(PRRSV)：引發母豬流產和仔豬呼吸道症狀，廣泛存在於養豬場中，防控挑戰大。

-豬圓環病毒(PCV)：廣泛存在，PCV-Ⅱ嚴重引起免疫抑制，對養豬場的生產效率有重大影響。 

牛作為乳製品和肉類的主要來源，其健康直接關係到畜牧業的產出與效益。以下是常見的牛病原體: 

-牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)：影響牛的繁殖和免疫功能，感染率高，潛在的經濟損失巨大。

-布魯氏菌(Brucella spp.)：可感染多種動物，引發繁殖問題並具有公共衛生風險，跨物種傳播對畜牧業造成威脅。

-牛結核病(Bovine Tuberculosis)：傳染性強，涉及人畜共患，且在牛群中的潛伏期長，防控極具挑戰性。

羊群健康是肉羊、奶羊生產的基礎，常見的病原體包括: 

-小反芻獸疫病毒(PPRV)：影響羊和山羊的高度致命性病毒，廣泛傳播於非洲和亞洲地區，疫苗普及率不均衡。

-羊支原體肺炎(Mycoplasma pneumonia)：引發呼吸道疾病，影響羊群的生產效益。

-布魯氏菌(Brucella spp.)：同樣在羊中具有傳播風險，影響繁殖能力，並對公共衛生構成威脅。 

傳統的病原體檢測方法如PCR(聚合酶鏈式反應)，需要專業設備和技術支持，雖然檢測靈敏度和特異性較高, 但其局限性顯而易見； 

-時間耗費長：傳統PCR檢測往往需要數小時甚至數天才能得出結果,延遲了疫情控制的最佳時間窗口。

-設備依賴性強：PCR等方法需要熱循環儀等昂貴的設備,特別是在偏遠地區的養殖場,技術和設備的缺乏成為普及的障礙。

-操作複雜：需要專業的實驗人員進行操作和數據分析,增加了檢測的複雜性和成本。

-不可現場檢測：大多數傳統檢測方法要求樣本必須送至實驗室進行分析，這樣的操作流程延長了從採樣到結果的時間。 

上述因素在重大疫情暴發時尤其明顯，如非洲豬瘟的蔓延，傳統的實驗室檢測往往無法及時應對，導致大範圍的疫情擴散。

多酶恆溫快速核酸擴增技術(MIRA)的原理與優勢 

1.工作原理：MIRA(Multi-enzyme Isothermal Rapid Amplification)技術依靠多種功能蛋白在常溫下協同作用,實現核酸的快速擴增, 是能夠真正實現便攜式的現場快速核酸檢測技術。

2.與傳統PCR相比的優勢

-更快的檢測速度：MIRA技術可以在5分鐘至20分鐘內完成擴增，相較於PCR的數小時反應時間，顯著提高了檢測效率。

-無需昂貴設備：MIRA技術在恆溫下完成反應，不需要複雜的熱循環儀，只需簡單的恆溫裝置即可操作，適合現場檢測和移動檢測。

-操作簡便：MIRA技術無需專業的實驗操作技能，養殖場主和技術員經過簡單培訓即可使用，大大降低了人力成本。

-適應性強：MIRA技術可以在多種環境下進行檢測，不受複雜實驗室條件的限制，特別適合遠程和資源有限的地區。

3.MIRA技術在病原體快速檢測中的應用：通過對常見病原體的快速檢測，MIRA技術可以在動物出現臨床症狀之前及時發現潛在的感染源，幫助養殖場主採取早期防控措施。尤其是在重大疫情如非洲豬瘟或布魯氏菌病的爆發時，MIRA技術提供了一種便捷且高效的檢測方式。

實驗操作

-實驗所需工具

-實驗操作步驟

1.取出快速核酸釋放劑（根據檢測病毒所屬DNA型/RNA型的不同，選擇不同的釋放劑）

2.將部分核酸釋放劑，放入採樣管中。

3.準備進行拭子採樣（口腔、鼻腔......），口腔採樣前2h，禁止入食。

4.在鼻腔/口腔處旋轉10-20次，採樣完畢後，將拭子頭部折斷，放入採樣管中。

5.顛倒混勻，靜置5min後，得到樣本裂解液。

6.樣本處理後，操作台進行消殺。

7.取出bbin宝盈(中国)生物成品檢測試劑盒，試劑為全凍干體系（酶凍干＋buffer微球），如需液體buffer，需要按照試劑產品說明書進行配置。

8.剪下所需數量的凍干微球試劑反應管（常規為8連排；需要做陽性對照與陰性對照，管蓋上進行標記）

9.打開管蓋，加入樣本裂解液。（可查看試劑復溶狀態）

10.上下顛倒混勻8-10次，進行充分混勻

11.打開數碼化恆溫檢測儀，開蓋放入反應管，點擊右側開關，點擊加熱按鈕。

12.運行4min響起提示音，取出試劑，再上下顛倒混勻8-10次，放入原方向原位置反應倉。

13.再次16min後擴增完成，查看結果。